GB∕T 38132-2019 转基因植物品系定量检测数字PCR法
|
ID： |
3A29B6A2A1E6459A9B436E348C5B96FF |
|
文件大小(MB)： |
0.87 |
|
页数： |
10 |
|
文件格式： |
|
|
日期： |
2024-8-14 |
|
购买： |
文本摘录（文本识别可能有误，但文件阅览显示及打印正常，pdf文件可进行文字搜索定位）：
ICS 07.080,A 40 も昌,中华人民共和国国家标准,GB/T 38132—2019,转基因植物品系定量检测数字PCR法,Quantitative determination of genetically modified plants by digital PCR method,2019-10-18 发布 2019-10-18 实施,铲6国电，.,邕越,0犒綴黔",国家市场监督管理总局,中国国家标准化管理委员会,舌リ挨层査发伪ノノ,GB/T 38132—2019,刖 百,本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草,本标准由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC 387)提出并归口,本标准起草单位:上海市计量测试技术研究院、苏州百源基因技术有限公司、中国检验检疫科学研,究院、中国农业科学院生物技术研究所、中国测试技术研究院生物研究所、甘肃国研检验检测有限公司、,四川出入境检验检疫局检验检疫技术中心、中国科学院上海高等研究院,本标准主要起草人:梁文、付伟、李亮、刘刚、李妍、车团结、周李华、林华、杨镇州、朱鹏宇、马丽侠、,樊春海、王丽华、张莹,GB/T 38132—2019,转基因植物品系定量检测数字PCR法,1范围,本标准规定了转基因植物品系的数字PCR定量检测方法,本标准适用于种子及物理加工种子样品中转基因玉米MON810品系、MON89034品系、MIR162,品系,转基因大豆GTS-40-3-2品系,转基因水稻克螟稻品系,转基因棉花GHB119品系,转基因油菜,RT73品系的数字PCR法定量检测,本方法的定量检测限为0」%(质量分数),2规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件,GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法,GB/T 19495.1转基因产品检测通用要求和定义,GB/T 19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法,GB/T 19495.7转基因产品检测 抽样和制样方法,SN/T 4853(所有部分)转基因大米定量检测 数字PCR法,3术语和定义、缩略语,3.I 术语和定义,下列术语和定义适用于本文件,品系特异序列 event specific sequence,外源DNA片段插入受体作物基因组后重组产生的邻接区序列,3.2 缩略语,下列缩略语适用于本文件,Adh-1 :玉米乙醇脱氢酶基因(Alcohol dehydrogenase 1),Adhc:乙醇脱氢酶 C 基因(Alcohol dehydrogenase C gene),PCR:聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction),PEP:磷酸烯醇式丙酮酸竣化酶基因(Phosphoenolpyruvate carboxylase gene),PLD:磷脂酰胆碱磷脂水解酸基因(Phospholipase D gene),4原理,数字PCR其技术原理是通过将原始PCR反应体系进行分割,进而对所有小的反应体系进行扩增,并后续检测。通过对反应体系进行有限的分割,从而使整个反应体系可以更加耐受核酸抑制因子,并且,更加稳定、准确、快速地对痕量的转基因成分进行精准鉴定,1,GB/T 38132—2019,目前数字PCR包括芯片式数字PCR和微滴式数字PCR两种。芯片式数字PCR通过微流控芯片,实现对原始反应体系的分割,这种分割方式具有稳定性好、均一性好的优点,但试验成本相对较高;微滴,式数字PCR通过产生微小油包水体系实现反应体系的分割,这种分割方式反应速度快,分割成本更低,为了实现转基因植物品系数字PCR定量检测,本标准通过数字PCR扩增反应直接得出转基因植,物外源基因（品系特异序列）和植物内源基因的拷贝数含量。样品DNA中的外源基因和内源基因的拷,贝数的比值（百分数）即为样品中相应的转基因植物品系的相对百分含量,5试剂和材料,除另有说明,本方法使用的谢噌为分析纯,水为GB/f!霹瞰定的一级水,5.1 植物基因组DN八嫌鑽剂盒ユ,5.2 数字PCR预混丒洛有能理】,R同的蛔组提取试剂盒,、dNTPs和具有5'-3‘外切活稗耀启DNA聚合酶的数字,PCR专用预混试剂丒雏整解不同的数字PCR仪说明书选择,5.3引物及探针:检测不同植物品系的引物探针序列具体信息见表1。扩土腌列髄息参见附录A,靶标,玉米MON810品系,特异序列,9GATG],FAMもACCA. ATGGAC,玉米 MON890.31,品系特气序列'、■ ■,玉米MIR162’品系-,特异序列 ,ゝ\,、外源下游引物,探针,上游引物,GGT "GGl>TT,'TA',TYCCCj,GCTTAGCCTCCAC( TT,FAM-GTCCTCGTCGCT^CCC7>CACCT-BH QI,CGTCGTT^rCAT^TTCCTCC,玉米基因Adh-1 tccga^Tccctcagtc,VIC-AATCAGGQ^CATTTTCTCGCTCCTCA-BHQl,大豆 GTS-4O-3-2,品系特异序列,上游引物,下游引物,探针,TAGCATCTACATATAGCTTC,GACCAGGCCATTCGCCTCA,FAM-ACAAAACTATTTGGGATCGGAGAAGA-BHQ1,大豆基因しectin-1 内源,上游引物GCCCTCTACTCCACCCCCA,下游引物GCCCATCTGCAAGCCTTTTT,探针VIC-AGCTTCGCCGCTTCCTTCAACTTCAC-BHQ1,水稻克螟稻品……
……